一、标本采集

　　（一）?采样器材

　　商品化采血管（或负压采血管）、无菌试管、一次性注射器、标记清楚且不易脱落的记号笔、50ml螺口塑料管、无菌的剪刀、镊子和手术刀、血平板和商品化血培养瓶、采样表、一次性隔离服、乳胶手套、鞋套、一次性口罩、碘伏或含氯消毒剂。

（二）?标本种类

　　疑似猪链球菌感染的败血症型病例血液含菌量较高，而脑膜炎型病例脑脊液含菌量较高，因此应尽早采集病人血液、脑脊液标本做病原菌分离培养，不需要采集鼻咽拭子。如尸解则采集心血、肝、脾、胸（腹）水等组织标本。尸体解剖最好在死亡后6小时内完成，以免腐生菌造成标本污染。

　　1.血　液

　　在病人入院后用药前，采集静脉血6-8ml，直接滴3-5滴于血平板，同时将3-5ml血注入到血培养瓶增菌，留3ml注入到无菌采血管内分离血清，血凝块不要丢弃，应放冰箱暂存，以备检查急性期抗体和抗原。在病人病后2周，采集第2次血液注入无菌采血管分离血清，以备检查病人恢复期抗体。

　　2.脑脊液

　　疑似脑膜炎型病例应抽取脑脊液(CSF)做细菌培养。取患者CSF2-3ml，注入无菌试管内，3000转/分离心20分钟，用无菌吸管取沉淀物直接接种于新鲜血平板做细菌培养。CSF沉淀物还可做涂片，作革兰氏染色镜检。CSF离心后的上清液置低温冰箱保存，以备检查抗原。

　　3.组织标本

　　疑似猪链球菌感染的死亡病例，若做尸解可采集心血、肝、脾、胸（腹）水，死亡牲畜可采集心血、肝、脾、肺、肾、胸（腹）水、淋巴结等组织标本，每种标本取样20-30克，可现场直接涂抹分离于新鲜血平板，或冷藏带回实验室再分离。接种后组织标本置50ml螺口塑料管中，放低温冰箱保存。

　　（三）?采样记录

　　记录病人的姓名、性别、年龄、家庭住址、采集日期与时间、临床诊断等信息（见附表）。

　　二、分离与鉴定

　　1.生长特性

　　猪链球菌在普通琼脂平板上生长很差，在新鲜血平板上生长良好，在巧克力平板上生长状况不及血平板。增菌培养可用5%兔血清肉汤或其他营养丰富的肉汤，在商品化的血培养瓶中生长良好。5%CO2培养有助于其生长，但非必需。

　　2.细菌形态

　　猪链球菌属于链球菌属，为革兰氏阳性球菌，大小0.8-1um,革兰氏染色结果有时不稳定，在固体培养基中常成双或成单排列，链状较短或少见，液体培养液中可形成长链。

　　3.菌落形态

　　猪链球菌在新鲜血平板上，37℃培养24小时，其菌落直径约1mm，表面突起，光滑湿润、圆整，半透明略带灰白色，菌落周围有轻微溶血环（属α溶血），对着光源从平板背面较易观察。随着培养时间延长，菌落增大，可逐渐变为不透明，溶血现象更明显。

　　4.初步鉴定

　　根据镜下形态和菌落形态可以初步判断为链球菌，有条件的单位可以用API 20 strep 生化鉴定条进行初步生化鉴定。目前国内尚无猪链球菌诊断血清供应。

　　没有鉴定条件的单位，将分离到的可疑菌株直接保存，及时上送四川省疾病预防控制中心，以进行猪链球菌生化鉴定及毒力基因测定。?

　　三、采样要求与注意事项

　　1.尽可能在用药前采集血液标本做分离培养，不要等到临床诊断已明确时再采集标本。

　　2.采集尸检标本时要注意无菌操作，剪破腹膜前应用碘伏消毒腹膜表面，用无菌容器盛装组织标本。尽快冷藏带回实验室，可同时在现场接种血平板。

　　3.采样过程中，需注意个人防护。应使用一次性隔离服、手套、防护口罩等防护措施，防止针头等锐器刺伤。

　　4.采样完毕后，应在两个盛装有消毒剂的桶中完成消毒。先戴着手套在一个消毒桶中消毒双手，然后依次脱去隔离服及手套，再次在另一个消毒桶中消毒双手。

　　5.分离培养等操作应在2级生物安全柜中进行。如无此条件，也应在无菌操作间进行，操作台上垫浸有消毒剂的纱布，并穿好隔离服，戴好手套和口罩，特别强调应戴好乳胶手套，做好个人防护。

　　四、标本保存与上送

　　1.菌株保存

　　经初步观察，该菌株在血平板上于４℃时可存活1周，为尽快确诊可同时直接上送血平板。如不需立即鉴定的菌株，可将分离纯化的可疑菌接种于血平板，37℃培养18-24小时，刮取菌苔乳化于脱脂牛奶，或含20%甘油的心脑肉汤中，4℃可保存2周（更长保存时间有待观察）。

　　2.组织标本的保存

　　应用螺口塑料管盛装组织标本，在上送前，暂放-20℃保存。

　　3.标本上送

　　分离到的可疑菌株、组织标本、急性期与恢复期血清、急性期血凝块应及时上送四川省疾病预防控制中心。运送过程中注意冷藏，将标本密封后放置在带有冰袋或者冰排的泡沫箱或保温箱中。所有标本应附有详细的送检表。

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样品采集及送检表

采样（送检）者：　　　　　　　　 　.　

实验室收到时间：　　　　　　　　? 实验室接收人签字 ：　　　　　　? ?.